Southern印跡法的基本步驟是什麼

Southern印跡法的基本步驟

1、 在瓊脂糖凝膠上電泳分離DNA。取出凝膠，切去邊緣多於部分，EB染色，在紫外燈下照相（放一標尺，可從像片中讀出DNA遷移的距離）。

2、 將凝膠置於200mL變性液中，浸泡45分鐘，並温和地不斷振盪，使凝膠上的ds-DNA轉變為ss-DNA，然後用重蒸水沖洗凝膠幾次。

3、 用中和液浸泡凝膠並不斷地振盪45分鐘，將凝膠中和至中性。防止凝膠的鹼性破壞硝酸纖維膜。

4、 取一個瓷盤，在底部放一塊玻璃板（或一塊海綿）使盛器內的20倍SSC轉移濾液低於玻板表面，在玻板表面蓋一張3mm的二號濾紙，濾紙兩邊浸沒於20倍 SSC溶液中，在玻璃和濾紙之間，趕掉所有的氣泡。

5、 把凝膠底面朝上放在濾紙上，趕走兩層之間出現的氣泡。

6、 裁剪一張硝酸纖維膜，其長與寬大於凝膠1—2mm，並在角上作記號，以確定濾膜方位。先把它放在去離子水中潤濕後，再放在20倍SSC溶液中潤濕5分鐘，然後放在凝膠表面，兩層之間不可有氣泡。

7、 然後再把兩張與濾膜一樣大小的二號濾紙，在2倍SSC溶液中浸濕，覆蓋在硝酸纖維膜上，同樣要把氣泡趕走。

8、 把一疊吸水紙（或衞生紙，約有5—8cm高，略小於濾紙），放置在濾紙上，在吸水紙上再放一塊玻璃板和重約500g的重物，放置過夜。

9、轉移結束後，移去上面的吸水紙和濾紙，同時翻轉取出凝膠與硝酸纖維膜，把凝膠的點樣與硝酸纖維膜的相對應位置用鉛筆或解剖針的針尖做好標記。

11、 把已轉移了DNA的硝酸纖維膜放在6倍SSC溶液中振盪浸泡5分鐘，然後放在濾紙上吸乾溶液。再把它夾在兩層濾紙之間，80℃真空乾燥2小時。