seqman連接dna是什麼原理

DNA分子的體外連接就是在一定條件下， 由DNA連接 酶催化兩個雙鏈DNA片段組鄰的5’端磷酸與3’端羥基之間形成磷酸酸脂鍵的生物化學過程， DNA分子的連接是在酶切反應獲得同種酶互補序列基礎上進行的。

帶有相同末端(平端或粘端)的外源DNA必須克隆到具有匹配末端的線性質體載體中，但是在連接反應時，外源DNA和質體都可能發生環化，也有可能形成串聯寡聚物。

因此，必須仔細調整連接反應中兩個DNA 的濃度，以便使“正確”連接產物的數量達到最佳水平，此外還常常使用鹼性磷酸酶去除5’磷酸基團以抑制載體DNA的自身環化。利用T4 DNA連接酶進行目的DNA和載體的體外連接反應，也就是在雙鏈DNA 5’磷酸和相鄰的3’羥基之間形成新的共價鍵。如載體的兩條鏈都帶有5’磷酸(未脱磷)，可形成4個新的磷酸二酯鍵如載體DNA已脱磷，則只能形成2個新的磷酸二酯鍵，此時產生的重組 DNA帶有兩個單鏈缺口，在導入感受態細胞後可被修復。