eb顯色的原理

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eb顯色的原理

EB染色的原理是EB插入到DNA的鹼基對之間,然後在紫外光照射下激發發光。所以DNA含量越高,而且DNA鏈越長的條帶就會越亮。

溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑,用於觀察瓊脂糖(agarose)和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。

溴化乙錠用標準302nm 紫外光透射儀激發並放射出橙紅色信號。觀察瓊脂糖凝膠中DNA最常用的方法是利用熒光染料溴化乙錠進行染色,溴化乙錠含有一個可以嵌入DNA堆積鹼基之間的一個三環平面基團。它與DNA的結合幾乎沒有鹼基序列特異性。

在高離子強度的飽和溶液中,大約每2.5個鹼基插入一個溴化乙錠分子。當染料分子插入後,其平面基團與螺旋的軸線垂直並通過範德華力與上下鹼基相互作用。這個基團的固定位置及其與鹼基的密切接近,導致與DNA結合的染料呈現熒光,其熒光產率比遊離溶液中染料有所增加。溴化乙錠可以用來檢測單鏈或雙鏈核酸(DNA或RNA)。但是染料對單鏈核酸的親和力相對較小,所以其熒光產率也相對較低。DNA量越多,條帶就會越亮。

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